一、方法概要：
本方法係用以檢驗能在胰化蛋白 葡萄糖培養基（Tryptone Glucose
Extract Agar, TGE）或在培養皿計數培養基（Plate Count Agar,
PCA） 中生長並形成菌落之水中好氧及兼性壓氧異營菌。
二、適用範圍：
本方法適用於水中生菌數之檢驗。
三、干擾：
（一）水樣中含有抑制細菌生長物質。
（二）水樣中含有促進細菌生長物質。
（三）其他。
四、設備：
本方法所使用之器皿均應經滅菌處理。
（一）量筒：10mL、25mL、50mL及100mL 。
（二）吸管：1mL 、5mL 及10mL之玻璃吸管，刻度至0.1mL 。
（三）培養皿：使用90×15mm或100 ×15mm之塑膠或玻璃製品，底面平滑
無氣泡、刮傷或其他缺點者。
（四）稀釋瓶：一般使用有100mL 刻度且能耐高壓滅菌之硼矽玻璃製品。
（五）採樣容器：玻璃或塑膠製有蓋容器；使用無菌袋亦可。
（六）冰箱：溫度能保持在 0至 5℃者。
（七）水浴槽：溫度能保持在45± 1℃者。
（八）培養箱：溫度能保持在35± 1℃者。
（九）乾壓滅菌釜：用於培養基和稀釋液等不能乾熱滅菌之材料及用具等
之滅菌。溫度能保持在121℃ （壓力約15 1b/in2 或1kg/cm2 ）滅
菌十五分鐘以上者。
（十）乾熱滅菌器：用於玻璃器皿等用具之滅菌。溫度能保持在一六０℃
、二小時或一七０℃、一小時者。
五、試劑：
（一）培養基：可選取下列二者之一來培養細菌。
1. 化蛋白 葡萄培養基（Tryptone Glucose Extract Agar, TGE）
葡萄糖（Glucose） 1.0g
胰化蛋白 （Tryptone）5.0g
牛肉抽出物（Beef extract）3.0g
瓊脂（Agar）15.0g
蒸餾水（Distilled Water） 1,000mL
經121℃ 滅菌十五分鐘後pH值為6.9 ±0.1 。
2.培養皿計數培養基（Plate Count Agar, PCA ）
葡萄糖（Glucose） 1.0g
胰化蛋白 （Tryptone）5.0g
酵母抽出物（Yeast extract）2.5g
瓊脂（Agar）15.0g
蒸餾水（Distilled Water） 1,000mL
經121℃ 滅菌十五分鐘後pH值為7.0 ±0.2 。
（二）稀釋液：
1.磷酸二氫鉀溶液：
取3.4g磷酸二氫鉀溶於50mL之蒸餾水中，俟完全溶解後，以1.0 M
氫氧化鈉溶液調整其pH值為7.2 ±
0.5 。然後加蒸餾水至全量為100mL ，儲存於冰箱中做為原液備用
。
2.氯化鎂溶液：
取8.1g氯化鎂（MgC12.6H2O），先溶於少量蒸餾水中，俟完全溶解
後，再加蒸餾水至全量為100mL ，儲存於冰箱中做為原液備用。
分別取10mL氯化鎂溶液和2.5mL 磷酸二氫鉀溶液再加入蒸餾水至全
量為2,000mL ，混搖均勻後，分裝於稀釋瓶中，經121℃ 滅菌十五
分鐘以上，做為稀釋液備用。
六、採樣與保存：
（一）採樣：
1.使用清潔並經滅菌之容器或無菌袋。
2.水樣若含有餘氯時，在採樣時應加入適量之硫代硫酸鈉（120mL 的
採樣容器加入0.1mL 10％的硫代硫酸鈉可還原15mg/L的餘氯）。
3.所採取之樣品應具有代表性，且在檢驗之前不再被污染。
4.水樣之量須以能做完所需檢驗為原則，但不得少於100mL 。
（二）保存：
1.水樣之運送及保存須在 0至5℃ 的條件下進行。
2.水樣必須在二十四小時內進行檢驗（建議在採樣後六小時內進行檢
驗）。
七、步驟：
步驟（一）至（五）須在無菌操作檯內操作完畢。
（一）水樣取回後，先進行水樣稀釋步驟，分別使用滅菌之吸管依序做成
一系列適當之一０倍、一００倍、一、０００倍、一０、０００倍
等稀釋水樣並混搖均勻，其稀釋方法如圖二所示。
（二）將約15mL之培養基倒入培養皿並靜置至凝固。
（三）將上述培養皿倒置於培養箱內，使其失去 2至 3g 之水分。培養箱
溫度、失水克數及所需時間關係表如下：
┌──────┬────────────────┐
│所需＼失重水│ 培 養 基 失 水 克 數 │
│＼ 時＼ 量 ├───┬───┬───┬────┤
│培 ＼ 間＼ │ │ │ │ │
│養溫 ＼ ＼│１公克│２公克│３公克│ ４公克 │
│箱度 ＼ │ │ │ │ │
├──────┼───┼───┼───┼────┤
│ ２４℃ │32小時│64小時│95小時│125小時 │
├──────┼───┼───┼───┼────┤
│ ３７℃ │17小時│35小時│51小時│ 67小時 │
├──────┼───┼───┼───┼────┤
│ ５０℃ │ 6小時│12小時│18小時│ 24小時 │
├──────┼───┼───┼───┼────┤
│ ６０℃ │ 4小時│ 8小時│12小時│ 16小時 │
└──────┴───┴───┴───┴────┘
（四）吸取0.2mL 的原水及各稀釋濃度水樣滴在培養基上，每一稀釋濃度
至少做兩個培養皿。
（五）將已滅菌之彎曲玻棒放在培養基上再用手或旋轉桌（turntable）
旋轉培養皿至水樣均勻分佈於培養基表面。
（六）放置一盤水於培養箱底部。
（七）倒置培養皿於培養箱內，在35± 1℃下培養48± 3小時。若形成的
菌落不明顯，則繼續培養二十四小時。
（八）取含30至300 個菌落的培養基在菌落計數器中計數。同一培養皿至
少應計數兩次，取其平均值。
八、結果處理：
（一）取含30至300 個菌落之同一稀釋倍數的兩個培養皿來計算其生菌數
，生菌數以CFU/mL（Colony Forming Units/mL） 表示之。計算公
式如下：
X ＋ Y 1.0
生菌數（CFU/mL）＝────×D×───
2 0.2
X，Y：同一稀釋倍數兩個培養皿之菌落數。
D ：步驟七（一）之稀釋倍數。
（二）若培養皿之菌落數不在三０至三００個之間，則依菌落數實際數目
以下列方式處理：
1.若各稀釋倍數中僅有一個稀釋倍數之一個培養皿之菌落數在三０至
三００個之間，則以上列公式計算之，並註明為估計生菌數。
2.若各培養皿均無菌落生長，則生菌數以小於上乘以最低稀釋倍數表
示之，並註明為估計生菌數。
3.若各培養皿之菌落數均不在三０至三００個之間，則以最接近三０
至三００個菌落數之同一稀釋倍數兩個培養皿來計數。以上列公式
計算。並註明為估計生菌數。
4.若僅原水有菌落產生且少於三０個亦應計數，並註明為估計生菌數
。
5.若各稀釋倍數中有兩個稀釋倍數之培養皿之菌落數在三０至三００
個之間，則以下列公式計算之。並註明為估計生菌數。
（X1＋Y1）×D1＋（X2＋Y2）×D2
生菌數（CFU/mL）──────────────4
1.0
×───
0.2
D1、D2：菌落數在三０至三００個之稀釋倍數。
X1、X2：D1稀釋倍數兩個培養皿之菌落數。
X1、X2：D2稀釋倍數兩個培養皿之菌落數。
（三）菌落數若大於一００個以上時，個位數四捨五入，只取兩位有效數
字。例如菌落數為一四二時以一四０表示之，菌落數為一五五時以
一六０表示之。
（四）報告必須註明水樣保存時間、培養溫度、培養時間及使用之培養基
。
九、品質管制：
（一）培養皿若有擴散菌落產生，且超過培養皿面積之1/2 時應不予計算
。
（二）培養皿被擴散菌落抑制之菌落，超過培養皿面積之1/4 時應不予計
算。
（三）擴散菌落為一條鏈狀時，視為一個菌落。兩條以上且生長起源不同
時，每一條鏈視為一個菌落，若起源相同則僅視為一菌落。
（四）同一培養皿若由兩個人各計數一次，其差異不得超過一０％，若由
同一人計數兩次以上，其差異不得超過五％。
十、精密度及準確度：
略
十一、參考資料：
（一）U.S. APHA-A WWA-WPCF.1989. 1989. Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater,17th ed.pp.9-54. Ameri
can Public Health Assoc, Washington, D.C.
（二）Van Soestbergan, A.A. & C.H. Lee. 1969. PourPlates or stre
ak plates. Appl. Microbiol. 18：1092.
（三）Kaper, J.B, A.L. Mills & R.R. Colwell. 1978.Evaluation of
the accuracy and precision of enumerating aerobic heterotr
ophs in water samples by the spread mathod. Appl. Environ.
Microbiol. 35：756.
（四）Buck, J.D. & R.C. Clevendor. 1960. The spread plate as a m
ethod for the enumeration of marine
bacteria. Limnol. Oceanoger. 5：78.
（五）中國國家標準，1988，食品微生物之檢驗法－生菌數之檢驗。經濟
部中央標準局，CNS 10890 6186。
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