1.適用範圍：本檢驗方法適用於禽畜肉、內臟及其製品中殘留馬杜拉黴素
  （maduramicin） 之檢驗。

2.檢驗方法：高效液相層析法（high performance liquid chromatogra-
  phy，HPLC）。
  2.1 裝置：
    2.1.1 高效液相層析儀：
      2.1.1.1 檢出器：螢光檢出器。
      2.1.1.2 層析管：RP-18，10um，內徑4.6mm×5cm，或同級品。
    2.1.2 攪拌均質機（Homogenizer）
    2.1.3 振盪器（Shaker）。
    2.1.4 減壓濃縮裝置（Rotary evaporator）。
  2.2 試藥。乙及正己烷採用液相層析級：丹醯（七七）（dansyl hy-
      drazine ）、四丁基銨－酸鹽（tetrabutylammonium-hydrogen s-
      ulfate）及三氯乙酸（trichloroacetic acid）採用化學試藥特級
      ；馬杜拉黴素對照標準品。
  2.3 器具及材料：
    2.3.1 抽氣瓶：250mL 。
    2.3.2 布赫納漏斗（Buchner funnel）：直徑11cm。
    2.3.3 分液漏斗：250mL 。
    2.3.4 矽酸鎂過濾層析匣（ Sep-Pak Florisil cartridge，Classic
          ），或同級品。
    2.3.5 濃縮瓶：250mL 。
    2.3.6 濾膜：孔徑0.45um，polyvinylidene difluoride 材質。
    2.3.7 玻璃小瓶：20mL，瓶蓋襯墊為鐵氟龍材質。
  2.4 移動相溶液之調製：
      取四丁基銨－硫酸鹽 0.25g溶解於乙及去離子水75：25（V／V）
      1000mL溶液中，混合均勻後以濾膜過濾，取濾液作為移動相溶液。
  2.5 試劑之調製：
    2.5.1 衍生化試劑：將濃度為7.5mg/mL之丹醯（七七）3mL 與濃度為
          15％之三氯乙酸 3mL均勻混合。
    2.5.2 99％乙溶液：乙與去離子水以99： 1（v/v） 之比例混合
          。
    2.5.3 90％乙溶液：乙與去離子水以90：10（v/v） 之比例混合
          。
  2.6 標準溶液之配製：
      取馬杜拉黴素對照標準品約 100mg，精確稱定，以乙溶解並容至
      100mL 作為標準原液，使用時再以乙稀釋供作標準溶液。
  2.7 檢液之調製：
    2.7.1 萃取：
          取細切之動物組織檢體約 25g，精確稱定，置於均質機中，加
          入乙50mL，均質二分鐘後，以布赫納漏斗抽氣過濾。殘渣再
          以乙每次50mL，同樣操作二次。合併濾液於分液漏斗中，加
          入以乙飽和之正己烷50mL，振盪五分鐘。乙層移入濃縮瓶
          中，於45℃水浴減壓濃縮至乾。殘留物以乙10mL溶解供淨化
          用。
    2.7.2 衍生化：
          取 2.7.1節之淨化用溶液，以濾膜過濾後，置入已盛有衍生化
          試劑 6mL之玻璃小瓶內，迅速振搖10秒鐘。
    2.7.3 淨化：
          將 2.7.2節經衍生化反應之淨化用溶液倒入預先以乙 5mL潤
          洗過之矽酸鎂過濾層析匣，棄流出液。再以99％乙溶液 5mL
          清洗一次。棄流出液，最後以90％乙溶液 5mL注入層析匣沖
          提，收集沖提液，並以90％乙定容至 5mL。
  2.8 鑑別試驗及含量測定：
      精確量取檢液及標準溶液各75uL，分別注入高效液相層析儀中，參
      照下列條件進行液相層析，就檢液與標準溶液所得波峰之滯留時間
      比較鑑別之，並依標準曲線求檢體中馬杜拉黴素之含量（ ppm）：
                                   C×V
      檢體中馬杜拉黴素含量（ppm）＝───
                                    M
      C ：由標準曲線或波峰面積求得檢液中馬杜拉黴素之濃度（ ug/mL
          ）
      V ：檢體最後經衍生化定容之體積（mL）
      M ：取樣分析檢體之重量（g）
      高效液相層析測定條件：
      層析管柱：RP-18，5um，內徑4.6mm×25cm。
      螢光檢出器：激發波長 220nm，發射波長 470nm。
      移動相溶液：依 2.4節所調製之溶液。
      移動相流速：2.7mL/min 。
  備註：本檢驗方法之最低檢出含量為 0.2ppm

參考文獻：
Gliddon,M,J.,Wright,D.,Markantonatos,A.and Groth,W.1988. Determ-
ination or Maduramicin Ammonium in Poultry Feedstuffs by High-P-
erformance Liquid Chromatography.Analyst 113：813-816.