1.適用範圍：本檢驗方法適用於禽畜水產品中歐索林酸（ oxolinic acid
  ）、那利得酸（nalidixix acid）、氟滅菌（flumequine）、piromid-
  ic acid、大安氟羧酸（ danofloxacin）、恩氟羧酸（enrof-
  loxacin）及 sarafloxacin之檢驗。

2.檢驗方法：高效液相層析法（high performance liquid chromatogra-
  phy, HPLC）	
  2.1 裝置：
    2.1.1 高效液相層析儀：
      2.1.1.1 檢出器：光二極體列陣檢出器（photodiode array dete-
              ctor）及螢光檢出器（fluorescence detector） 串連使
              用。
      2.1.1.2 層析管：Cosmosil 5C18-AR-Ⅱ，5um，內徑 4.6mm×25cm
              ，或同級品。
    2.1.2 攪拌均質器（Blender）。
    2.1.3 均質機（Homogenizer）。
    2.1.4 振盪器（Shaker）。
    2.1.5 減壓濃縮裝置（Rotary evaporator）。
  2.2 試藥：乙及甲醇均採用液相層析級，氫氧化鈉、磷酸二氫鈉、偏
      磷酸、磷酸、正丙醇、正已烷及十二碳基硫酸鈉（ sodium lauryl
      sulfate 或sodium dodecyl sulfate）均採用試藥特級，歐索林酸
      、那利得酸、氟滅菌、piromidic acid、大安氟羧酸、恩氟
      羧酸及 sarafloxacin 對照用標準品。
  2.3 器具及材科：
    2.3.1 抽氣瓶：250mL 。
    2.3.2 布赫納漏斗（Buchner funnel）：直徑 8cm。
    2.3.3 分液漏斗：250mL 。
    2.3.4 C18 固相萃取匣（Bond Elut C18 cartridge）：200mg，或同
          級品。
    2.3.5 濃縮瓶：250mL 。
    2.3.6 濾膜：孔徑0.45um，nylon 材質。
  2.4 0.05M 磷酸二氫鈉緩衝溶液之調製：
      稱取磷酸二氫鈉6.9g，加水 950mL溶解，以磷酸調整PH值至 2.5，
      再加水至 1000mL。
  2.5 移動相溶液之調製：
      取 0.05M磷酸二氫鈉緩衝溶液 650mL，加10％十二碳基硫酸鈉溶液
      10mL，混合均勻，再加入乙 350mL，混合均勻後，以濾膜過濾，
      取濾液供作移動相溶液。
  2.6 標準溶液之配製：
      取歐索林酸、那利得酸、氟滅菌、piromidic acid及 sarafloxac-
      in 對照用標準品各約 10mg，精確稱定，分別以 0.01N氫氧化鈉：
      甲醇（2:8, v/v） 溶液溶解並定容至100mL；另取大安氟羧酸
      及恩氟羧酸各約10mg，精確稱定，分別以甲醇溶解並定容至10
      0mL ，作為標準原液。使用時再量取上述各標準原液共置於容量瓶
      中，以移動相溶液稀釋，供作標準溶液。
  2.7 檢液之調製：
    2.7.1 萃取：
          將檢體細切，以攪拌均質器均質後，取檢體約5g，精確稱定，
          置於均質機中，加入 0.3％偏磷酸：乙（1:10,v/v）溶液30
          mL，均質 3分鐘後，倒入附有濾紙之布赫納漏斗內，抽氣過濾
          。濾液移入分液漏斗中，加入以乙飽和之正已烷50mL，振盪
          5 分鐘。乙層移入濃縮瓶中，加入正丙醇 5mL，於40℃水浴
          減壓濃縮至乾，殘留物以水10mL溶解，供作淨化用。
    2.7.2 淨化：
          取 2.7.1節之淨化用溶液，注入預經甲醇10mL活化之 C18固相
          萃取匣，再以水10mL潤洗，原濃縮瓶以10％甲醇溶液 5mL清洗
          二次，洗液亦注入 C18固相萃取匣，棄洗出液，原濃縮瓶再以
          甲醇：0.05M 磷酸二氫鈉緩衝溶液（7:3,v/v）5mL清洗二次，
          洗液亦注入 C18固相萃取匣沖提，收集沖提液，於40℃水浴減
          壓濃縮至乾，殘留物以移動相溶液溶解並定容至 1mL，經濾膜
          過濾後，供作檢液。
  2.8 鑑別試驗及含量測定：
      精確量取檢液及更準溶液各20uL，分別注入高效液相層析儀中，參
      照下列條件進行液相層析，就檢液與標準溶液所得波峰之滯留時間
      比較鑑別之，光二極體列陣檢出器並進行吸收圖譜比對，再依下列
      計算式求出檢體中各動物用藥之含量（ ppm）：
                                               Ｃ×Ｖ
      檢體中各動物用藥之含量（ppm）＝（ppm）＝─────
                                                 Ｍ
      Ｃ：由標準曲線求得檢液中各動物用藥之濃度（ug/mL）
      Ｖ：檢體經淨化後定容之體積（mL）
      Ｍ：取樣分析檢體之重量（g）
      高效液相層析測定條件：
      光二極體列陣檢出器：波長 260nm（那利得酸），波長 286nm（p-
      iromidic acid）。
      螢光檢出器：激發波長 327nm／放射波長 367nm（歐索林酸及氟滅
      菌），激發波長 295nm／放射波長 446nm（大安氟羧酸及恩氟
      羧酸），激發波長 278nm/ 放射波長 442nm（ saraflo xacin
      ）。
      移動相溶液：依 2.5節所調製之溶液。
      移動相流速：1.0mL/min 。
  備註：1.本檢驗方法之最低檢出限量為：歐索林酸，0.01ppm ；大安氟
          羧酸， 0.0006ppm；恩氟羧酸及sarafloxacin，0.00
          2ppm；那利得酸、piromidic acid及氟滅菌，0.02ppm。
        2.檢體中若有影響檢驗結果之物質，應自行探討。