法規資訊

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法規名稱: 食品中動物用藥殘留量檢驗方法-鏈黴素與雙氫鏈黴素之檢驗
廢止時間: 中華民國102年10月1日

所有條文

1.適用範圍:本檢驗方法適用於畜禽水產等食品中殘留鏈黴素(strepto-
  mycin) 與雙氫鏈黴素(dihydrostreptomycin) 之檢驗。

2.檢驗方法:高效液相層析法(high performance liquid chromatogra-
  phy, HPLC)。
  2.1 裝置:
    2.1.1 高效液相層析儀:
      2.1.1.1 檢出器:具有激發波長 263nm及發射波長 435nm之螢光檢
              出器(fluorescence detector)。
      2.1.1.2 層析管:Supelcosil LC-ABZ ,5μm,內徑 4.6mm×25cm
              或同級品。
      2.1.1.3 後置反應裝置(Post-column reactor):
        2.1.1.3.1 恆溫槽:可加熱至65℃。
        2.1.1.3.2 氫氧化鈉溶液反應圈:內徑 0.5mm×3.6m之不鏽鋼管
                  。
    2.1.2 旋渦混合器(Vortex mixer)。
    2.1.3 振盪器(Shaker)。
    2.1.4 離心機(Centrifuge)。
    2.1.5 真空固相萃取裝置(Solid phase extraction vacuum manif-
          old )。
    2.1.6 氮氣蒸發裝置(Nitrogen evaporator)。
    2.1.7 攪拌均質器(Blender)。
  2.2 試藥:
      甲醇、乙  、己烷磺酸鈉鹽(1-hexanesulfonic acid, sodium s-
      alt )採液相層析級;三氯乙酸(trichloroacetic acid)、磷酸
      二氫鉀、磷酸氫二鉀、1,2-金雞鈉 -4-磺酸(1,2-naphthoquin-
      one-4-sulfonic acid sodium salt, NQS)、二水合草酸(oxalic
      acid dihydrate)、氫氧化鈉、硫酸鈉、磷酸及醋酸均採試藥特級
      ;硫酸鏈黴素及硫酸雙氫鏈黴素對照標準品。
  2.3 器具及材料:
    2.3.1 離心管:50mL,附蓋。
    2.3.2 容量瓶: 1、25、50、 100、 200、 500及1000mL。
    2.3.3 C18 固相萃取匣:500 mg,Sep-Pak Vac C18 或同級品。
    2.3.4 濾膜:孔徑0.45μm,nylon材質。
    2.3.5 抽氣瓶:1000mL。
  2.4 試劑之調製:
    2.4.1 7.5 %二水合草酸溶液:
              稱取二水合草酸 15g,以水溶解後使成 200mL。
    2.4.2 10%三氯乙酸溶液:
          稱取三氯乙酸 20g,以水溶解後使成 200mL。
    2.4.3 0.2 M 離子配對試劑:
          稱取己烷磺酸鈉鹽 1.88g,以水溶解後使成50mL。
    2.4.4 2 M 氫氧化鈉溶液:
          稱取氫氧化鈉8g,以水溶解後使成 100mL。
    2.4.5 0.02 M己烷磺酸鈉鹽緩衝溶液:
          稱取己烷磺酸鈉鹽 1.88g,以水溶解,加入醋酸 1mL,加水使
          成 500mL。
    2.4.6 0.2 M 磷酸氫二鉀溶液:
          稱取磷酸氫二鉀 6.97g,以水溶解後使成 200mL。
    2.4.7 0.2 M 磷酸溶液:
          量取磷酸1.37mL,以水溶解後使成 100mL。
    2.4.8 0.2 M pH 3.3磷酸緩衝溶液:
          稱取磷酸二氫鉀13.61g,以去離子水溶解後定容至 500mL,再
          以0.2M磷酸溶液調整pH值至 3.3。
  2.5 移動相溶液之調製:
    2.5.1 稱取硫酸鈉1.5g、己烷磺酸鈉鹽1.8g、1,2-金雞鈉 -4-磺酸
          0.8g,以去離子水 500mL溶解後,加入0.2M pH 3.3 磷酸緩衝
          溶液50mL及乙  55mL,再以去離子水定容至1000mL,混勻,以
          濾膜過濾,取濾液供作肉類檢體分析之移動相溶液。
    2.5.2 稱取硫酸鈉1.5g、己烷磺酸鈉鹽1.8g、1,2-金雞鈉 -4-磺酸
          0.8g,以去離子水 500mL溶解後,加入0.2M pH 3.3 磷酸緩衝
          溶液50mL及乙  80mL,再以去離子水定容至1000mL,混勻,以
          濾膜過濾,取濾液供作乳品檢體分析之移動相溶液。
  2.6 後置反應溶液:
      稱取氫氧化鈉9.2g,以水溶解後使成1000mL,配製成 0.23M氫氧化
      鈉溶液,以濾膜過濾,取濾液供作後置反應溶液。
  2.7 標準溶液之配製:
      稱取硫酸鏈黴素及硫酸雙氫鏈黴素對照標準品各約12.5mg,精確稱
      定,分別以去離子水溶解並定容至25mL作為標準原液。使用時再以
      去離子水稀釋成濃度為 0.1~10μg/mL,供作標準溶液。
  2.8 檢液之調製:
    2.8.1 萃取:
      2.8.1.1 乳品
              量取檢體10mL,置於50mL離心管中,加入 7.5%二水合草
              酸溶液 2mL,振盪20分鐘,以 3500rpm離心20分鐘。取上
              澄液,加入10%三氯乙酸溶液 2mL,振盪20分鐘,以3500
              rpm 離心20分鐘。取上澄液,加0.2M離子配對試劑 0.8mL
              ,室溫下靜置15分鐘,加入2M氫氧化鈉溶液 0.7mL,混勻
              後以 3500rpm離心20分鐘,上澄液供淨化用。
      2.8.1.2 肉類
              檢體細切、均質後,取檢體5g,精確稱定,置於50mL離心
              管中,加入0.2M磷酸氫二鉀溶液15mL,混勻後加入 7.5%
              二水合草酸溶液 4mL,振盪20分鐘,以 3500rpm離心20分
              鐘。取上澄液,加入10%三氯乙酸溶液 4mL,振盪20分鐘
              ,以 3500rpm離心20分鐘。
              取上澄液,加入0.2M離子配對試劑 1.6mL,室溫下靜置15
              分鐘,加入2M氫氧化鈉溶液 1.4mL,混勻後以 3500rpm離
              心20分鐘,上澄液供淨化用。
    2.8.2 淨化:
          取 2.8.1節淨化用溶液,注入預經甲醇 3mL,去離子水 3mL及
          0.02 M己烷磺酸鈉鹽緩衝溶液 3mL依序潤洗之 C18固相萃取匣
          。棄流出液,以去離子水 3mL流洗兩次,棄洗液,再以 0.02M
          己烷磺酸鈉鹽緩衝溶液與乙  9:11(v/v)之混合溶液 2mL沖
          提,沖提液於40℃水浴以氮氣吹乾,加入去離子水定容至 1mL
          ,以濾膜過濾,供作檢液。
  2.9 鑑別試驗及含量測定:
      精確量取檢液及標準溶液各100μL,分別注入高效液相層析儀中,
      參照下列條件進行液相層析,就檢液與標準溶液所得波峰之滯留時
      間比較鑑別之,並依下列計算式求出檢體中鏈黴素與雙氫鏈黴素之
      含量( ppm):
                                           C×V
      檢體中鏈黴素與雙氫鏈黴素含量(ppm)=──
                                            M
      C :由標準溶液求得檢液中鏈黴素與雙氫鏈黴素之濃度(μg/mL)
      V :檢體經淨化後最後定容之體積(mL)
      M :取樣分析檢體之重量(g)
      高效液相層析測定條件:
      層析管柱:Supelcosil LC-ABZ,5 μm,內徑4.6mm×25cm
      螢光檢測器:激發波長 263nm,發射波長 435nm
      移動相溶液:依 2.5節所調製之溶液
      移動相流速:0.8 mL/min
      後置反應溶液:依 2.6節所調製之溶液
      後置反應溶液流速:0.5 mL/min
      後置反應槽溫度:65℃
      備註:
      1.本檢驗方法之檢出限量於乳品為 0.02ppm,肉類為 0.1ppm。
      2.食品中若有影響檢驗結果之物質,應自行探討。