1.適用範圍：本方法適用於食品中耶辛尼氏腸炎桿菌之檢驗。
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2.檢驗方法
2.1 工作環境：工作平臺須寬敞、潔淨、光線良好（操作平臺光度為10
0 呎燭光），儘可能沒有灰塵及流動空氣。微生物密度之要求為：
每15分鐘落菌數不得超過 15CFU／培養皿。
2.2 器具及材料
2.2.1 乾熱滅菌器。
2.2.2 高壓滅菌釜。
2.2.3 冰箱：能維持5±3℃者。
2.2.4 吸管：已滅菌， 1mL吸管應有0.01mL之刻度； 5及10mL吸管應
有 0.1mL刻度。
2.2.5 培養皿：已滅菌，內徑約99mm，深度約15mm，底皿之內外面應
平坦，無氣泡、刮痕或其他缺點。
2.2.6 稀釋用容器：無菌袋或有 450mL，99mL，90mL標記附蓋之廣口
瓶。
2.2.7 培養箱：能維持內部溫差在±1.0 ℃以內者。
2.2.8 水浴：能維持水溫溫差在±1.0 ℃以內者。
2.2.9 攪拌均質器（Blender） 或鐵胃（ Stomacher）：能適用於無
菌操作者。
2.2.10 曲玻棒。
2.2.11 顯微鏡：能放大至1000倍之一般光學顯微鏡。
2.2.12 試管：10×100mm，13×100mm試管或其他合適者。
2.2.13 載玻片及蓋玻片：能於染色、鏡檢時使用之載玻片及蓋玻片
。
2.2.14 接種針及接種環（直徑約 3mm）：鎳鉻合金，鉑銥或鉻線，
或可拋棄式接種環。
2.2.15 天平：靈敏度為 0.1g。
2.2.16 精密天平：靈敏度為0.001g。
2.2.17 振盪器。
2.2.18 藥勺、剪刀、小刀、鑷子：可滅菌。
2.2.19 pH測定儀。
2.2.20 研缽、杵：研磨試藥用。
2.2.21 馬克法蘭氏濁度標準組（McFarland nephelometer standa-
rd units）。
2.2.22 無菌濾膜：孔徑 0.2μm 之親水性醋酸纖維膜。
2.2.23 標準菌株：Yersinia enterocolitica CCRC 13999，ATCC96
10。
2.2.24 抽氣櫃。
2.2.25 濾紙。
2.2.26 培養基
2.2.26.1 蛋白 山梨醇膽鹽培養液（Peptone sorbitol bile
broth, PSBB）
磷酸氫二鈉（Na2HP） 8.23g
磷酸二氫鈉（NaH2PO4 H2O） 1.2g
膽鹽 3 號（bile salts No.3） 1.5g
氯化鈉（NaCl） 5.0g
山梨醇（sorbitol） 10.0g
蛋白（peptone） 5.0g
蒸餾水 1000mL
加熱攪拌溶解後，取225mL注入稀釋用容器內，以121℃
滅菌15分鐘，最終pH值為7.6±0.2。
2.2.26.2 馬康奇培養基（MacConkey agar）
蛋白 或聚蛋白 （proteose peptone or polypepto-
ne） 3.0g
蛋白 （peptone） 17.0g
乳糖（lactose） 10.0g
膽鹽 3號（bile salts No.3） 1.5g
氯化鈉（NaCl） 5.0g
中性紅（neutral red） 0.03g
結晶紫（crystal violet） 0.001g
洋菜（agar） 13.5g
蒸餾水 1000mL
加熱攪拌沸騰溶解後，以 121℃滅菌15分鐘。冷卻至45
～50℃，並搖動混勻，搖動時應避免產生氣泡，最終pH
值為7.1±0.2。取約20mL倒入培養皿，使用時培養基表
面應保持乾燥。
2.2.26.3 溴甲酚紫培養液（Bromcresol purple broth）
蛋白（peptone） 10.0g
牛肉抽出物（beef extract） 3.0g
氯化鈉（NaCl） 5.0g
溴甲酚紫（bromcresol purple） 0.04g
蒸餾水 1000mL
加熱攪拌溶解後，取上述之培養液 2.5mL注入試管，以
121 ℃滅菌10分鐘，加入經0.2μm濾膜過濾除菌之50％
（W/ V）之甘露糖醇（mannitol）原液0.278mL ，使糖
類之最終濃度為5％（W/V），最終pH值為7.0±0.2。
含山梨醇（sorbitol）、纖維二糖（cellobiose）、核
糖醇（adonitol）、肌醇（inositol）、木糖（xylose
）、海藻糖（trehalose）、蔗糖（sucrose）、鼠李糖
（rhamnose）、棉子糖（raffinose）、蜜二糖（meli-
biose）及水楊（salicin）之溴甲酚紫培養液配製方
法亦同。
2.2.26.4 脫羧基礎培養液（Decarboxylase basal medium）
蛋白（peptone） 5.0g
酵母抽出物（yeast extract） 3.0g
葡萄糖（glucose） 1.0g
溴甲酚紫（bromcresol purple） 0.02g
蒸餾水 1000mL
取L-精胺酸（L-arginine）5g溶解於上述之培養液，加
熱攪拌溶解後，分取適量注入試管，以 121℃滅菌10分
鐘，最終pH值為6.5±0.2。
含L-離胺酸（L-lysine），L-鳥胺酸 （L-ornithine）
之脫羧酸基礎培養液配製方法亦同。對照組之配製，除
脫羧酸基礎培養液成分外，不添加任何物質。
2.2.26.5 克立斯田生氏尿素培養基（Christensen's urea
agar）
A 基礎培養基（basal medium）
蛋白（peptone） 1.0g
氯化鈉（NaCl） 5.0g
葡萄糖（Glucose） 1.0g
磷酸二氫鉀（KH2PO4） 2.0g
酚紅（phenol red） 0.012g
洋菜（agar） 15.0g
蒸餾水 900mL
B 濃尿素溶液（urea concentrate）
尿素（urea） 20.0g
蒸餾水 100mL
將尿素溶於蒸餾水後，以無菌濾膜過濾除菌。
C 培養基之製備：將基礎培養基加熱溶解後，以 121℃
滅菌15分鐘，冷卻至 50-55℃，加入無菌之濃尿素溶液
，均勻混合後，最終pH值為6.8±0.1。分裝至已滅菌之
試管，並作成斜面培養基。
2.2.26.6 苯丙胺酸脫胺基培養基（Phenylalanine deaminase
agar）
酵母抽出物（yeast extract） 3.0g
L-苯丙胺酸（L-phenylalanine） 1.0g
或 DL-苯丙胺酸（DL-phenylalanine） 2.0g
磷酸氫二鈉（Na2HPO4） 1.0g
氯化鈉（NaCl） 5.0g
洋菜（agar） 12.0g
蒸餾水 1000mL
加熱攪拌沸騰溶解後，分取適量注入試管，以 121℃滅
菌10分鐘，最終pH值為7.3±0.2，並作成斜面培養基。
2.2.26.7 甲基紅-歐普氏培養液（MR-VP broth）
緩衝蛋白（buffered peptone） 7.0g
葡萄糖（glucose） 5.0g
磷酸氫二鉀（K2HPO4） 5.0g
蒸餾水 1000mL
加熱攪拌溶解後，分取適量注入試管，以 121℃滅菌15
分鐘，最終pH值為6.9±0.2。
2.2.26.8 運動性試驗培養基（Motility test medium）
牛肉抽出物（beef extrct） 3.0g
蛋白（peptone） 10.0g
氯化鈉（NaCl） 5.0g
洋菜（gagr） 4.0g
蒸餾水 1000mL
加熱攪拌沸騰溶解後，分取適量注入試管，以 121℃滅
菌15分鐘，最終pH值為6.9±0.2。
2.2.26.9 胰化蛋白培養液（Tryptone or tryptophane
broth）
胰化蛋白（tryptone） 10.0g
蒸餾水 1000mL
加熱攪拌溶解後，分取5mL注入試管，以121℃滅菌15分
鐘，最終pH值為6.9±0.2。
2.2.26.10 膽栗糖培養基（Bile esculin agar）
牛肉抽出物（beef extract） 3.0g
蛋白（peptone） 5.0g
栗糖（esculin） 1.0g
牛膽（oxgall） 40.0g
檸檬酸鐵（ferric citrate） 0.5g
洋菜（agar） 15.0g
蒸餾水 1000mL
加熱攪拌沸騰溶解後，分取適量注入試管，以 121℃滅
菌15分鐘，最終pH值為6.6±0.2，並作成斜面培養基。
2.2.26.11 CIN 培養基（Cefsulodin-irgasan novobiocin agar,
CIN）
A.基礎培養基（basal medium）
蛋白（peptone） 20.0g
酵母抽出物（yeast extract） 2.0g
甘露糖醇（mannitol） 20.0g
丙酮酸鈉鹽（sodium pyruvate） 2.0g
氯化鈉（NaCl） 1.0g
硫酸鎂（MgSO4.7H2O），10mg/Ml 1.0mL
洋菜（agar） 12.0g
蒸餾水 756mL
B.Irgasan 溶液（Irgasan solution）
以95％乙醇配製 Irgasan為0.40％溶液。 1mL
此溶液可在 -20℃貯存 4週。
C.去氧膽酸鹽溶液（desoxycholate solution）
去氧膽酸鈉（sodium desoxycholate） 0.5g
蒸餾水 200mL
攪拌煮沸，冷卻至 50-55℃備用。
D.5N 氫氧化鈉（sodium hydroxide）溶液 1mL
E.中性紅（neutral red）, 3mg/mL 10mL
F.結晶紫（crystal violet），0.1mg/mL 10mL
G.西蘇羅錠（cefsulodin）溶液，1.5mg/mL 10mL
可將此溶液貯存在 -70℃，使用前解凍回溫至室溫。
H.新生黴素（novobiocin）溶液，0.25mg/mL 10mL
I.10％氯化鍶（strontium chloride）溶液，以無菌濾
膜過濾除菌。 10mL
將基礎培養基加熱攪拌溶解，冷卻至80℃，加入溶液
B 混勻後，冷卻至50-55℃，再加入溶液C及經無菌濾
膜過濾除菌之E，F，G，H，攪拌並緩緩加入溶液 I，
以5N氫氧化鈉溶液調整pH值至7.4，分取15-20mL倒入
培養皿。
2.2.26.12 辛蒙斯檸檬酸鹽培養基（Simmons citrate agar）
檸檬酸鈉（sodium citrate） 2.0g
氯化鈉（NaCl） 5.0g
磷酸氫二鉀（K2HPO4） 1.0g
磷酸二氫銨（NH4H2PO4） 1.0g
硫酸鎂（MgSO4） 0.2g
溴香草酚藍（bromthymol blue） 0.08g
洋菜（agar） 15.0g
蒸餾水 1000mL
加熱攪拌沸騰溶解，分取適量注入試管，以 121℃滅菌
15分鐘，最終pH值為6.8±0.2，製成斜面4-5cm，高2-3
cm。
2.2.26.13 TSA 培養基（Trypticase soy agar,TSA）
胰化酪蛋白 （tyrpticase peptone） 5.0g
大豆蛋白 （phytone peptone） 5.0g
洋菜（agar） 13.5g
氯化鈉（NaCl） 5.0g
蒸餾水 1000mL
加熱攪拌溶解，以121℃滅菌15分鐘，最終pH值為7.3±
0.2。
2.2.26.14 厭氧蛋黃培養基（Anaerobic egg yolk agar，AEY）
A.基礎培養基（basal medium）
酵母抽出物（yeast extract） 5.0g
胰化蛋白 （tryptone） 5.0g
蛋白 （proteose peptone） 20.0g
氯化鈉（NaCl） 5.0g
洋菜（agar） 20.0g
蒸餾水 1000mL
加熱攪拌沸騰溶解後，以 121℃滅菌15分鐘，最終pH
值為7.0±0.2。
B.蛋黃液：取二個新鮮蛋浸於70％乙醇一小時，無菌操
作取出蛋黃加入等量無菌生理食鹽水中混合均勻。可
使用市售之蛋黃液（50％）
C.培養基之製備：取蛋黃液80mL加入冷卻至48～50℃之
基礎培養基，並搖動混勻，搖動時應避免產生氣泡，
取約20mL倒入培養皿，使用時培養基表面應保持乾燥
。
2.2.26.15 離胺酸精胺酸鐵培養基（Lysine arginine iron agar,
LAIA）
蛋白 （peptone） 5.0g
酵母抽出物（yeast extract） 3.0g
葡萄糖（glucose） 1.0g
L-離胺酸（L-lysine） 10.0g
L-精胺酸（L-arginine） 10.0g
檸檬酸鐵銨（ferric ammonium citrate） 0.5g
硫代硫酸鈉（sodium thiosulfate） 0.04g
溴甲酚紫（bromcresol purple） 0.02g
洋菜（agar） 15.0g
蒸餾水 1000mL
加熱攪拌沸騰溶解後，分取適量注入試管，以 121℃滅
菌12分鐘，最終pH值為6.8±0.2，並作成斜面培養基。
2.2.26.16 醯胺培養基（Pyrazinamidase agar）
胰化酪蛋白大豆培養基（trypticase soy agar）30.0g
酵母抽出物（yeast extract） 3.0g
羧醯胺（pyrazine carboxamide） 1.0g
0.2M tris-maleate ，pH6.0 1000mL
經加熱攪拌溶解後，分取適量注入試管，以 121℃滅菌
15分鐘，作成斜面培養基。
2.2.26.17 ITC 培養液（Irgasan ticarcillin chlorate broth,
ITC broth）
胰化蛋白（tryptone） 10.0g
酵母抽出物（yeast extract） 1.0g
氯化鎂（MgCl2 ．6H2O） 60.0g
氯化鈉（NaCl） 5.0g
氯酸鉀（potassium chlorate） 1.0g
孔雀石綠（malachite green），0.2 ％ 5mL
蒸餾水 1000mL
調整培養液pH值為7.6±0.2，以 121℃滅菌15分鐘，加
入經無菌濾膜過濾，濃度為1mg/mL之ticarcillin 1 mL
及濃度為1mg/mL之irgasan DP 300 1L。
2.2.26.18 BHI 培養基（Brain heart infusion agar,BHI）
小牛腦浸出物（calf brain,infusion from） 200.0g
牛心浸出物（beef heart infusion from） 250.0g
蛋白（proteose peptone） 10.0g
氯化鈉（NaCl） 5.0g
葡萄糖（glucose） 2.0g
磷酸氫二鈉（Na2HPO4） 2.5g
洋菜（agar） 15.0g
蒸餾水 1000mL
調整 pH 為 7.4。
2.2.27 試藥：膽鹽 3號、山梨醇、中性紅、纖維二糖、核糖醇、肌
醇、木糖、海藻糖、鼠李糖、棉子糖、蜜二糖、水楊、尿
素、L-苯丙胺酸、 DL-苯丙胺酸、栗糖、丙酮酸鈉鹽、硫
酸鎂、去氧膽酸鈉、西蘇羅錠（cefsulodin）、新生黴素（
novobiocin）、氯化鈉、氯化鍶、氯化鎂、氯酸鉀、氯化鐵
（ferric chloride）、ticarcillin、磷酸二氫銨、對位二
甲胺基苯甲醛、戊醇、孔雀石綠、溴香草酚藍、 羧醯胺
、tris-maleate、4-硝基苯-β-D-葡萄糖派喃醣（4-nit-
rophenyl-β-D-glucopyranoside ）、葡萄糖、L-精胺酸、
檸檬酸鐵銨、硫代硫酸鈉、溴甲酚紫、蔗糖、檸檬酸鈉、牛
膽、檸檬酸鐵、乳糖、酚紅、磷酸氫二鉀、L-離胺酸、L-鳥
胺酸、甘露糖醇、結晶紫、草酸銨、碘化鉀、沙黃O（safr-
anin O）、α-酚（α-naphthol）、氫氧化鉀、肌酸（c-
reatine）、乙醇、鹽酸、N,N,N', N'-四甲基對位苯二胺鹽
酸鹽（N,N,N',N'-tertamethyl- -phenylenediamine．2HCl
）、硫酸銨亞鐵（Ferrous ammonium sulfate）、irgasan
、irga-san DP300、磷酸二氫鈉、氫氧化鈉、磷酸氫二鈉、
磷酸二氫鉀、礦物油、無水酒精、液態石臘、碘等均採用化
學試藥級。蛋白 、蛋白 、植物蛋白 、胰化酪蛋白 、
酵母抽出物、洋菜、牛肉抽出物、聚蛋白 、胰化蛋白 及
緩衝蛋白 等採用微生物級。
2.2.28 試劑：
2.2.28.1 0.5 ％食鹽水溶液
取氯化鈉5g溶於蒸餾水1000mL中，分取 9mL注入試管中
，以121℃滅菌15分鐘。
2.2.28.2 0.5 ％氫氧化鉀溶液
取氯化鈉5g及氫氧化鉀5g溶於蒸餾水1000mL中，分取 9
mL注入試管中，以 121℃滅菌15分鐘，使用時以新鮮配
製者為宜。
2.2.28.3 革蘭氏染色液（Gram stain solutions）
2.2.28.3.1 哈克氏（Hucker's）結晶紫液（初染劑）
溶液 A：取結晶紫2g溶於95％乙醇20mL。
溶液 B：取草酸銨0.8g溶於蒸餾水80mL。
將溶液 A與溶液 B混合，靜置24小時後以濾紙過濾
，取濾液作為初染劑。
2.2.28.3.2 革蘭氏碘液（媒染劑）
取碘化鉀2g及碘1g置於研缽中，經研磨 5～10秒鐘
後，加蒸餾水 1mL研磨，次加蒸餾水 5mL研磨，再
加蒸餾水10mL，研磨至碘化鉀和碘完全溶於水中，
將此溶液注入褐色瓶中，再以適量蒸餾水洗滌研缽
及杵後，以此洗液併入，使溶液達 300mL。此過程
應於抽氣櫃中進行。
2.2.28.3.3 哈克氏複染液（複染劑）
取沙黃O 2.5g溶於95％乙醇 100mL，供作複染原液
。使用時，取原液10mL加蒸餾水90mL，作為複染液
。
2.2.28.4 歐普氏試劑（Voges-Proskauer reagents,VP reagents
）
溶液 A：取α-酚5g溶於無水酒精100mL，冷藏備用。
溶液 B：取氫氧化鉀40g溶於蒸餾水100mL，冷藏備用。
2.2.28.5 柯瓦克氏試劑（Kovacs'reagent）
取對位二甲胺基苯甲醛5g溶於戊醇75mL，再徐徐加入濃
鹽酸25mL，混合均勻後應呈黃色，冷藏備用。
2.2.28.6 氯化鐵溶液（Ferric chloride solution）
取氯化鐵 10g溶於蒸餾水90mL，須置於深色瓶中，冷藏
備用。
2.2.28.7 氧化試劑（Oxidase reagent）
取N,N,N',N'-四甲基對位苯二胺鹽酸鹽1g溶於蒸餾水10
0 mL，貯存於褐色瓶，置於冰箱中，使用期限以一週為
宜。
2.2.28.8 1 ％硫酸銨亞鐵溶液（Ferrous ammonium sulfate sol
ution）
取硫酸銨亞鐵1g溶於蒸餾水 100mL，使用時，應新鮮配
製。
2.2.28.9 礦物油（Mineral oil） 或液態石臘
取礦物油或液態石臘20-50mL，裝入有蓋容器中約1/2滿
，以121℃滅菌30分鐘。
2.2.28.10 □-D- 葡萄糖試劑（β-D-glucosidase reagent）
取4-硝基苯-β-D- 葡萄糖派喃醣0.1g，溶解在0.67
M 磷酸二氫鈉（pH6）100mL，以無菌過濾膜除菌。
2.3 檢液之調製：取檢體25g加入PSBB培養液225mL，均質30秒；另可取
檢體25g加入ITC培養液225mL，均質30秒，作為檢液。
2.4 鑑別試驗
2.4.1 增菌培養
2.4.1.1 依 2.3節調製之檢液，使用PSBB培養液者，於10℃增菌培
養10天；使用ITC培養液者，於室溫增菌培養2天。
2.4.1.2 若懷疑為含高量耶辛尼氏菌，則取2.3節檢液0.1mL塗抹在
馬康奇及CIN培養基；並取2.3節檢液1mL加入0.5％氫氧化
鉀溶液9mL混合數秒，取0.1mL塗抹在馬康奇及CIN 培養基
。均於30℃培養24小時。
2.4.1.3 取 2.4.1.1節之增菌後之培養液0.1mL加入0.5％氫氧化鉀
溶液1mL混合5-10秒後，在馬康奇及CIN培養基上劃線；取
2.4.1.1 節之增菌液0.1mL加入0.5％食鹽水溶液1mL 混合
5-10秒後，在馬康奇及 CIN培養基上劃線接種。均於30℃
培養24小時。
2.4.2 分離培養
2.4.2.1 自2.4.1.2及2.4.1.3節培養結果，觀察所形成菌落之生
長狀態。若為可疑耶辛尼氏腸炎桿菌者，在馬康奇培養
基表面，其菌落之直徑 1-2mm，扁平狀，無色或淡粉紅
色；於CIN培養基上，其菌落之直徑1-2mm，無色透明且
有深紅色中心。
2.4.2.2 離胺酸精胺酸鐵培養基試驗（LAIA test）
自馬康奇及 CIN培養基上挑選典型菌落，穿刺劃線接種
於 LA-IA斜面培養基，於室溫培養48小時。耶辛尼氏腸
炎桿菌應為鹼性斜面（紫色）和酸性底部（黃色），無
氣體及無硫化氫產生。
2.4.2.3 尿素試驗（Urease test）
自馬康奇及 CIN培養基上挑選典型菌落，接種於克立斯
田生氏尿素培養基，於室溫培養48小時，培養基由桔紅
色變為紫紅色者為尿素正反應，仍維持桔紅色者為負
反應。耶辛尼氏腸炎桿菌應為正反應。
2.4.2.4 栗糖水解試驗（Esculin hydrolysis test）
自馬康奇及 CIN培養基上挑選典基菌落，接種於膽栗糖
培養基斜面，於室溫培養48小時，若培養基轉變為暗
棕至黑色者，為正反應，否則為負反應。耶辛尼氏腸炎
桿菌可為正及負反應。
2.4.3 鑑定
2.4.3.1 於 2.4.2.1節挑取之菌落，在LAIA斜面培養基上呈鹼性斜
面和酸性底部，無氣體及無硫化氫產生，且尿素試驗呈
正反應者，推定為耶辛尼氏桿菌，保留LAIA斜面培養基上
之菌株進一步鑑定，其中栗糖水解試驗呈正反應者，列
為優先；在LAIA斜面培養基上產生氣體或硫化氫，或尿素
負反應之菌株則可丟棄。
2.4.3.2 厭氧蛋黃培養基生長試驗（AEY growth test）
自LAIA斜面培養基鉤菌，劃線接種於 AEY培養基，於室溫
下培養24小時後，挑取 AEY培養基上生長之菌落，進行革
蘭氏染色、氧化試驗，及其他生化測試；將此 AEY培養
基繼續於室溫下培養，以供脂肪分解（lipase）試驗。
2.4.3.3 脂肪分解試驗（Lipase test）
在室溫下培養2-5天之AEY培養基，若有油膩、似珍珠光澤
的菌落，並圍繞著沉澱環，且外圍有透明環，即為脂肪分
解正反應，否則為負反應。耶辛尼氏腸炎桿菌可為正或
負反應。
2.4.3.4 革蘭氏染色（Gram stain）
A.自AEY培養基挑取培養18-24小時之菌種，於載玻片上製
成薄抹片，風乾或微熱固定。
B.初染：將已固定之抹片，用哈克氏結晶紫液染 1分鐘，
水洗，水洗應不超過5秒鐘。
C.媒染：加革蘭氏碘液作用 1分鐘，水洗。
D.脫色：用95％乙醇洗至不再有藍紫色褪出時，再以自來
水沖洗，此步驟需時甚短，僅數秒鐘即可，惟視抹片之
厚薄而定。
E.複染：用哈克氏複染液複染30秒鐘，水洗。
F.自然風乾。
G.鏡檢：呈現深紫色者為革蘭氏陽性菌，呈現淡紅色者為
革蘭氏陰性菌。
耶辛尼氏陽炎桿菌應為革蘭氏陰性，不產芽孢之短桿菌
。
2.4.3.5 細胞色素氧化試驗（Cytochrome oxidase test）
自 AEY培養基培養24小時之新鮮菌落，以接種環或無菌牙
籤，刮取少量細菌（避免使用鎳鉻鐵製品），置於有氧化
試劑濕潤濾紙上，在10秒鐘內出現深紫色者為正反應，
否則為負反應。耶辛尼氏腸炎桿菌應為負反應。
2.4.3.6 運動性試驗（Motility test）
自 AEY培養基上鉤菌，穿剌接種於運動性試驗培養基，深
度約 2/3培養基管深，於22-26℃和35-37℃培養24小時，
沿穿剌線有放射狀生長或培養基呈混濁者，為正反應，否
則為負反應。
2.4.3.7 脫羧試驗（Decarboxylase test）
自 AEY培基基上鉤菌，分別接種於離胺酸、鳥胺酸和精胺
酸脫羧培養液及脫羧基礎培養液中，接種後注入已滅
菌之液態石臘或礦物油覆蓋表面（約 1-2cm），鬆蓋並於
室溫培養 3天，每24小時觀察一次。當脫羧培養液呈紫
色，且脫羧基礎培養液呈黃色者為正反應，否則為負反
應。耶辛尼氏腸炎桿菌之鳥胺酸脫羧試驗應為正反應，
離胺酸和精胺酸脫羧試驗應為負反應。
2.4.3.8 苯丙胺酸脫胺基試驗（Phenylalanine deaminase test
）
自 AEY培養基上鉤菌，接種於苯丙胺酸脫胺基培養基斜
面，置於室溫培養3天，如入氯化鐵溶液2-3滴，輕輕搖動
，經1～5分鐘後觀察結果，呈現綠色者，則為正反應；維
持黃色者為負反應。耶辛尼氏腸炎桿菌應為負反應。
2.4.3.9 試驗（Indole test）
自AEY培養基上鉤菌，接種於胰化蛋白培養液5mL中，置
於室溫培養 3天，加入柯瓦克氏試劑0.2～0.3mL，輕輕搖
動後靜置幾分鐘，上層呈現紅色則為正反應，否則為負反
應。耶辛尼氏腸炎桿菌可為正或負反應。
2.4.3.10 歐普氏試驗（VP test）
自AEY培養基上鉤菌，接種於MR-VP培養液中，置於室溫
培養48小時，取 1mL培養液至另一已滅菌試管中，加入
溶液A0.6mL及溶液B0.2mL後，再加入少許肌酸，輕輕搖
勻，置於室溫 4小時後觀察結果，呈現粉紅至鮮紅色，
則為正反應，否則為負反應。耶辛尼氏腸炎桿菌可為正
或負反應。
2.4.3.11 溴甲酚紫糖類發酵試驗（Fermentation test）
自 AEY培養基上鉤菌，接種於含糖類之溴甲酚紫培養液
中，以無菌礦物油覆蓋1-2cm，置於室溫培養3天。每24
小時觀察一次，培養液顏色由紫色轉變為黃色，則為正
反應，否則為負反應。耶辛尼氏腸炎桿菌對含甘露糖醇
、山梨醇、蔗糖及纖維二糖者應為正反應；對含蜜二糖
、棉子糖、鼠李糖及核糖醇者應為負反應；對含海藻糖
、水楊、木糖及肌醇者可為正或負反應。
2.4.3.12 檸檬酸鹽利用試驗（Citrate utilization test）
自 AEY培養基鉤菌，穿刺劃線於辛蒙質檸檬酸鹽斜面培
養基中，置於室溫培養 3天，若能生長，且培養基由綠
色變為藍色，為正反應，否則為負反應。耶辛尼氏腸炎
桿菌應為負反應。
2.4.3.13 醯胺試驗（Pyrazinamidase test）
自 AEY培養基鉤菌，接種於 醯胺培養基斜面，置
於室溫培養48小時，覆蓋1％硫酸銨亞鐵溶液1mL，於15
分鐘內呈現粉紅色者為正反應；否則為負反應。耶辛尼
氏腸炎桿菌可為正或負反應。
2.4.3.14 β-D-葡萄糖試驗（β-D-glucosidase test）
自 AEY培養基鉤菌，以生理食鹽水調製菌液濃度為馬克
法蘭標準濁度3，取此菌液0.75mL加入β-D-葡萄糖
試劑0.25mL中，於30℃隔夜反應，呈現明顯黃色者為正
反應，否則為負反應。耶辛尼氏腸炎桿菌可為正或負反
應。
2.5 判定
耶辛尼氏腸炎桿菌陽性者，應符合表一所列之結果。由表二鑑定耶
辛尼氏腸炎桿菌之生物型。耶辛尼氏腸炎桿菌之菌株只有生物型1B
，2，3，4和5已知具致病性。
表一 耶辛尼氏腸炎桿菌之生化反應
┌────────────┬──────┬───────┬──┐
│試驗 │正反應（＋）│負反應（一） │耶辛│
│ │ │ │尼氏│
│ │ │ │腸炎│
│ │ │ │桿菌│
│ │ │ │之反│
│ │ │ │應* │
│ │ │ │ │
├────────────┼──────┼───────┼──┤
│革蘭氏染色 │陽性（深紫色│陰性（淡紅色）│- │
├────────────┼──────┼───────┼──┤
│細胞色素氧化試驗 │深紫色 │未出現深紫色 │- │
├────────────┼──────┼───────┼──┤
│栗糖水解試驗 │暗棕或黑色 │非暗棕或黑色 │± │
├────────────┼──────┼───────┼──┤
│尿素試驗 │紫紅色 │桔紅色 │＋ │
├──────┬─────┼──────┼───────┼──┤
│離胺酸精胺酸│斜面 │紫色 │黃色 │＋ │
│鐵培養基試驗├─────┼──────┼───────┼──┤
│ │底部 │紫色 │黃色 │- │
│ ├─────┼──────┼───────┼──┤
│ │產氣 │培養基斷裂 │培養基完整 │- │
│ ├─────┼──────┼───────┼──┤
│ │硫化氫 │黑色 │非黑色 │- │
├──────┼─────┼──────┼───────┼──┤
│運動性試驗 │22-26 ℃ │沿穿刺線 │沿穿刺線 │＋ │
│ │ │有放射狀生長│無放射狀生長 │ │
│ ├─────┼──────┼───────┼──┤
│ │35-37 ℃ │沿穿刺線 │沿穿刺線 │- │
│ │ │有放射狀生長│無放射狀生長 │ │
├──────┴─────┼──────┼───────┼──┤
│精胺酸脫羧試驗 │紫色 │黃色 │- │
├────────────┼──────┼───────┼──┤
│離胺酸脫羧試驗 │紫色 │黃色 │- │
├────────────┼──────┼───────┼──┤
│鳥胺酸脫羧試驗 │紫色 │黃色 │＋ │
├────────────┼──────┼───────┼──┤
│苯丙胺酸脫胺基試驗 │綠色 │黃色 │- │
├────────────┼──────┼───────┼──┤
│試驗 │表層產生紅色│表層產生黃色 │± │
├────────────┼──────┼───────┼──┤
│歐普氏試驗 │紅色 │原色 │± │
├──────┬─────┼──────┼───────┼──┤
│ │纖維二糖 │黃色 │紫色 │＋ │
│ ├─────┼──────┼───────┼──┤
│ │蜜二糖 │黃色 │紫色 │- │
│溴甲酚紫糖類├─────┼──────┼───────┼──┤
│發酵試驗 │棉子糖 │黃色 │紫色 │- │
│ ├─────┼──────┼───────┼──┤
│ │鼠李糖 │黃色 │紫色 │- │
│ ├─────┼──────┼───────┼──┤
│ │山梨醇 │黃色 │紫色 │＋ │
│ ├─────┼──────┼───────┼──┤
│ │木糖 │黃色 │紫色 │± │
│ ├─────┼──────┼───────┼──┤
│ │海藻糖 │黃色 │紫色 │± │
│ ├─────┼──────┼───────┼──┤
│ │水楊 │黃色 │紫色 │± │
│ ├─────┼──────┼───────┼──┤
│ │肌醇 │黃色 │紫色 │± │
│ ├─────┼──────┼───────┼──┤
│ │核糖醇 │黃色 │紫色 │- │
│ ├─────┼──────┼───────┼──┤
│ │蔗糖 │黃色 │紫色 │＋ │
│ ├─────┼──────┼───────┼──┤
│ │甘露糖醇 │黃色 │紫色 │＋ │
├──────┴─────┼──────┼───────┼──┤
│檸檬酸鹽利用試驗 │有菌落生長 │無菌落生長 │- │
│ │培養基呈藍色│培養基呈綠色 │ │
├────────────┼──────┼───────┼──┤
│醯胺試驗 │粉紅色 │非粉紅色 │± │
├────────────┼──────┼───────┼──┤
│β-D- 葡萄糖試驗 │黃色 │無色 │± │
└────────────┴──────┴───────┴──┘
* ＋表示在 3天後為正反應，- 表示在 3天後為負反應。鳥胺酸脫羧試
驗及溴甲酚紫蔗糖發酵試驗，生物型 5的某些菌株為負反應。
表二 耶辛尼氏腸炎桿菌之生物型
┌───────┬──────────────────┐
│生化試驗 │生物型* │
│ ├─┬─┬───┬─┬─┬───┬──┤
│ │1A│1B│2 │3 │4 │5 │6 │
├───────┼─┼─┼───┼─┼─┼───┼──┤
│脂肪分解試驗│＋│＋│- │- │- │- │- │
│ │ │ │ │ │ │ │ │
├───────┼─┼─┼───┼─┼─┼───┼──┤
│栗糖水解試驗│± │- │- │- │- │- │- │
│／水楊發酵試│ │ │ │ │ │ │ │
│驗（24 小時）│ │ │ │ │ │ │ │
├───────┼─┼─┼───┼─┼─┼───┼──┤
│ 試驗 │＋│＋│（＋）│- │- │- │- │
├───────┼─┼─┼───┼─┼─┼───┼──┤
│木糖發酵試驗 │＋│＋│＋ │＋│- │V │＋ │
├───────┼─┼─┼───┼─┼─┼───┼──┤
│海藻糖發酵試驗│＋│＋│＋ │＋│＋│- │＋ │
├───────┼─┼─┼───┼─┼─┼───┼──┤
│ 醯胺試驗│＋│- │- │- │- │- │＋ │
├───────┼─┼─┼───┼─┼─┼───┼──┤
│β-D- 葡匋糖│＋│- │- │- │- │- │- │
│試驗 │ │ │ │ │ │ │ │
├───────┼─┼─┼───┼─┼─┼───┼──┤
│歐普氏試驗 │＋│＋│＋ │± │＋│（＋）│- │
└───────┴─┴─┴───┴─┴─┴───┴──┘
*O：遲緩反應；V ；可變性的反應。
參考文獻：
1.Maturin,L.J. and Peler,J.T.1998.Chapter 3.Aerobic Plate Count.
In"FDA Bacteriological Analytical Manual." 8th ed.pp.3.01-3.1
0.AOAC International,Gaithersburg,MD.,USA.
2.Weagant,S.D., Feng, P. and Stanfield, J. T. 1998. Chapter 8.
Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis. In"
FDA Bacteriological Analytical Manual, 8th ed,.（Revision A）.
"pp.8.01-8.13.AOAC International,Gaithersburg,MD.,USA.
3.食品工業發展研究所.1997.菌種目錄第六版，p.145 ，新竹，臺灣。
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