1.適用範圍:本檢驗方法適用於貝類中麻痺性貝毒(paralytic shellfis
h poison)之檢驗。
2.檢驗方法:檢體經萃取後,以小鼠生物試驗(mouse bioassay)之方法
。
2.1 裝置:
2.1.1 酸鹼值測定儀(pH meter)。
2.1.2 水浴(Water bath)。
2.1.3 離心機(Centrifuge)。
2.1.4 均質機(Homogenizer)。
2.2 試藥:鹽酸採用試藥級。
2.3 器具及材料:
2.3.1 容量瓶:200 mL、1000 mL。
2.3.2 燒杯:250 mL。
2.3.3 離心管:50 mL,附PP材質螺旋蓋。
2.3.4 注射針:1 mL,針頭25 G以上。
2.3.5 計時器:可計至秒為單位。
2.4 試驗動物:ICR品系雄性小鼠,體重19~21 g(約4週齡)。
2.5 0.1N鹽酸溶液之調製:量取鹽酸8.33 mL,緩緩加入去離子水500
mL中,再加去離子水使成1000 mL。
2.6 0.01N鹽酸溶液之調製:量取鹽酸0.83 mL,緩緩加入去離子水50
0mL中,再加去離子水使成1000 mL。
2.7 檢液之調製:
以小刀切斷閉殼肌,打開殼,取出完整貝肉和中腸腺(含內臟、
腸道和生殖腺),分別切碎並攪拌均質化。取均質後檢體100 g
置於燒杯中,加入0.1N鹽酸溶液100 mL,若檢體量不足,則加入
等量0.1N鹽酸溶液。充分攪拌後以鹽酸溶液調整pH值至4以下。
加熱沸騰5分鐘後,冷卻至室溫。再調整pH值至2~4。移至200
mL容量瓶中,加水定容,充分攪拌。移至離心管中,以3000×g
離心10分鐘,取上清液供作檢液(此檢液1 mL相當0.5 g檢體重
量)。分別檢測貝肉和中腸腺的毒性。
2.8 小鼠生物試驗操作:
取檢液各1 mL,分別注入 3隻小鼠腹腔,觀察是否使實驗動物產
生特異性臨床徵狀,如呼吸困難、步履蹣跚、翻滾、四肢抽搐等
,並以計時器記錄致死時間。預備試驗中動物之致死時間在 5分
鐘以內時,將檢液以 0.01N鹽酸溶液進行不同比例之稀釋,供作
稀釋檢液,使再行注射之小鼠死亡時間落於較適當的5至7分鐘內
。取稀釋檢液各1 mL,再次分別注入 3隻小鼠腹腔,求其中間致
死時間。預備試驗中動物之致死時間在5分鐘以上時,再次使用5
隻以上小鼠,取檢液1 mL分別進行腹腔注射,求其中間致死時間
。
2.9 檢體毒素劑量之計算:
由中間致死時間參照麻痺性貝毒之致死時間-小鼠單位換算表(
附表一)計算檢液或稀釋檢液中麻痺性貝毒之小鼠單位(mouse
unit, MU/mL)。使用小鼠的體重在19 g以下或21 g 以上時,須
再乘以由小鼠體重-小鼠單位之校正表(附表二)求出之MU校正
係數。
檢體毒素劑量(MU/g)= C*MU 校正係數 *F/W
C:檢液或稀釋檢液之毒素量(MU/mL)
F:檢液稀釋倍數
W:檢液1 mL相當之檢體重量(g/mL)
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