法規名稱: 食品中海洋生物毒素之檢驗方法-麻痺性貝毒之檢驗(一)
時間: 中華民國100年3月28日

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1.適用範圍:本檢驗方法適用於貝類中麻痺性貝毒(paralytic shellfis
  h poison)之檢驗。 
2.檢驗方法:檢體經萃取後,以小鼠生物試驗(mouse bioassay)之方法
  。 
  2.1   裝置: 
    2.1.1   酸鹼值測定儀(pH meter)。 
    2.1.2   水浴(Water bath)。 
    2.1.3   離心機(Centrifuge)。 
    2.1.4   均質機(Homogenizer)。 
  2.2   試藥:鹽酸採用試藥級。 
  2.3   器具及材料: 
    2.3.1   容量瓶:200 mL、1000 mL。 
    2.3.2   燒杯:250 mL。 
    2.3.3   離心管:50 mL,附PP材質螺旋蓋。 
    2.3.4   注射針:1 mL,針頭25 G以上。 
    2.3.5   計時器:可計至秒為單位。 
  2.4   試驗動物:ICR品系雄性小鼠,體重19~21 g(約4週齡)。 
  2.5   0.1N鹽酸溶液之調製:量取鹽酸8.33 mL,緩緩加入去離子水500
        mL中,再加去離子水使成1000 mL。 
  2.6   0.01N鹽酸溶液之調製:量取鹽酸0.83 mL,緩緩加入去離子水50
        0mL中,再加去離子水使成1000 mL。 
  2.7   檢液之調製: 
        以小刀切斷閉殼肌,打開殼,取出完整貝肉和中腸腺(含內臟、
        腸道和生殖腺),分別切碎並攪拌均質化。取均質後檢體100 g
        置於燒杯中,加入0.1N鹽酸溶液100 mL,若檢體量不足,則加入
        等量0.1N鹽酸溶液。充分攪拌後以鹽酸溶液調整pH值至4以下。
        加熱沸騰5分鐘後,冷卻至室溫。再調整pH值至2~4。移至200 
        mL容量瓶中,加水定容,充分攪拌。移至離心管中,以3000×g
        離心10分鐘,取上清液供作檢液(此檢液1 mL相當0.5 g檢體重
        量)。分別檢測貝肉和中腸腺的毒性。 
  2.8   小鼠生物試驗操作: 
        取檢液各1 mL,分別注入 3隻小鼠腹腔,觀察是否使實驗動物產
        生特異性臨床徵狀,如呼吸困難、步履蹣跚、翻滾、四肢抽搐等
        ,並以計時器記錄致死時間。預備試驗中動物之致死時間在 5分
        鐘以內時,將檢液以 0.01N鹽酸溶液進行不同比例之稀釋,供作
        稀釋檢液,使再行注射之小鼠死亡時間落於較適當的5至7分鐘內
        。取稀釋檢液各1 mL,再次分別注入 3隻小鼠腹腔,求其中間致
        死時間。預備試驗中動物之致死時間在5分鐘以上時,再次使用5
        隻以上小鼠,取檢液1 mL分別進行腹腔注射,求其中間致死時間
        。 
  2.9   檢體毒素劑量之計算: 
        由中間致死時間參照麻痺性貝毒之致死時間-小鼠單位換算表(
        附表一)計算檢液或稀釋檢液中麻痺性貝毒之小鼠單位(mouse 
        unit, MU/mL)。使用小鼠的體重在19 g以下或21 g 以上時,須
        再乘以由小鼠體重-小鼠單位之校正表(附表二)求出之MU校正
        係數。
        檢體毒素劑量(MU/g)= C*MU 校正係數 *F/W
        C:檢液或稀釋檢液之毒素量(MU/mL) 
        F:檢液稀釋倍數 
        W:檢液1 mL相當之檢體重量(g/mL)