馬傳染性貧血症檢驗採用免疫擴散反應試驗
一、免疫擴散反應試驗：
（一）抗原：馬傳染性貧血病毒實驗感染之馬脾臟或經細胞培養增殖所得
      之培養液，再經精製濃縮供為免疫擴散法檢驗馬傳染性貧血抗體用
      之抗原。
（二）陽性對照血清：健康馬接種馬傳染性貧血病毒後之不活化血清。
（三）瓊膠平板的製作方法：
      瓊脂（Noble Agar）一公克，加入於一００公撮硼酸鹽緩衝溶液（
      附錄一）內煮沸溶解後，再經攝氏一二一度，十五磅壓力的高壓蒸
      氣滅菌七分鐘，待冷卻至攝氏四十五度，取十八公撮置入直徑十公
      分寬的培養皿內製成平板瓊脂凝膠層。
（四）使用方法：
      凝固後的瓊膠平板，用打孔器打出由中央一個，周圍六個，共七個
      小孔的反應組。其每一小孔之直徑為五公釐，各小孔距離為三公釐
      。反應組中心孔加入０．０五公撮抗原。周圍六個孔以間隔順序分
      別各加入對照血清及受檢血清０．０五公掫，最後將加入各檢體的
      瓊膠平板置於能保持濕度、溫度（攝氏二十至二十五度）的密閉容
      器內反應。
二、反應結果：
    免疫擴散反應試驗於反應後二十四至四十八小時觀察沈澱線，但得觀
    察至九十六小時判定。依下列方法判定之：
（一）陽性：抗原與受檢血清之間產生能和抗原與對照血清之間所產生之
      沈澱線（以下稱標準沈澱線）融合者。
（二）陰性：抗原與受檢血清之間無產生與標準沈澱線融合之沈澱線，標
      準沈澱線接近加入受檢血清之孔或者碰到者。
（三）疑陽性：不屬陽性或陰性者。
（四）非特異性：抗原與受檢血清之間產生與標準沈澱線不融合之沈澱線
      且形成交叉狀。
三、判定標準：
（一）有下列情形之一者，為罹患馬傳染性貧血症馬匹：
    1.免疫擴散反應試驗呈陽性者。
    2.免疫擴散反應試驗呈疑陽性者，經再複驗一次，其結果仍呈疑陽性
      或陽性者。
（二）免疫擴散反應試驗呈疑陽性者，為疑患馬傳染性貧血症馬匹。
（三）免疫擴散反應試驗呈陰性及非特異性者為健康馬匹。
四、複檢：疑陽性者應於初檢後二十一日再複驗一次，其結果仍呈疑陽性
    或轉呈陽性者為陽性，轉為陰性者為陰性。
五、檢驗次數：每年檢驗一次。
六、進口馬匹之檢疫：
    進口馬匹於檢疫期間，經檢驗判定為陰性者，准予放行；陽性者，立
    即撲殺。疑陽性者，另行隔離，經二十一日再行複驗一次，倘仍為疑
    陽性或轉為陽性者，立即撲殺；轉為陰性者，准予放行。
附錄一：
硼酸鹽緩衝溶液（Borate Buffer）配製法：
氫氧化鈉（NaOH）               二公克
硼酸（HBO）                    九公克
加蒸餾水至一公升使其溶解，並調整酸鹼值為八．六。