一、方法概要
    水樣經過濾後，以 90 ％丙酮溶液萃取其中之葉綠素ａ，再以分光光
    度計測得萃取液之吸光值，最後依吸光值計算水樣中葉綠素ａ含量。

二、適用範圍
    本方法適用於池、河、湖泊、水庫及海域等水中浮游植物所含葉綠素
    ａ之檢測。

三、干擾
  （一）葉綠素ａ之分解產物，如脫鎂葉綠素（Pheophytins） 及脫鎂葉
        綠甲酯一酸（ Pheophorbides），因其吸收波長與葉綠素 a  相
        同會產生之干擾。
  （二）浮游植物內之其他色素，如葉綠素ｂ、ｃ、葉黃素（Xanthophyl
        l）、藻膽色素（Phycobilins） 及類胡蘿蔔素（Carotenoids）
        等會產生干擾。
  （三）樣品具濁度時會產生干擾。

四、設備
  （一）分析天秤：能精稱至0.1g。
  （二）組織研磨器。
  （三）離心機。
  （四）離心管：10mL，具螺紋蓋。
  （五）分光光度計：頻寬（bandwidth） 在 0.5  至 2.0nm。
  （六）過濾裝置。
  （七）抽氣幫浦。
  （八）濾膜：0.45μm 孔徑之丙酮不溶性材質濾膜，直徑為47mm或其他
        尺寸。（如polypropylene,nylon, Polyestermembranes）
  （九）定量瓶：100mL。
  （十）移液管：10mL。
  （十一）採樣瓶：500mL 塑膠瓶。
  （十二）鑷子。
  （十三）酸鹼度計。

五、試劑
  （一）飽和碳酸鎂溶液
        將 1.0g 細粉狀碳酸鎂加入100mL蒸餾水中。
  （二）90％丙酮溶液將試藥級之丙酮與飽和碳酸鎂溶液以90：10之體積
        比混合。
  （三）葉綠素 a標準品。

六、採樣及保存
  （一）視水中浮游植物密度採取代表性水樣約 5 0至 1500mL ，並記錄
        使用水樣體積及 pH 。
  （二）採樣後立即放置暗處密封，以 4  ℃冷藏方式保存，期限不得超
        過24小時。
  （三）以幫浦過濾水樣於濾膜上。
  （四）過濾後之樣品亦可用冷凍方式保存，期限不得超過三星期。

七、步驟
  （一）萃取葉綠素 a
        1.將過濾後之濾膜放入組織研磨器中，並加入 2  至 3mL90  ％
          丙酮溶液，再以 500rpm 研磨 1  分鐘。
        2.將研磨後之液體倒入有螺紋蓋之離心管中，以 90 ％丙酮溶液
          淋洗研磨器，再將淋洗液倒入離心管中、並以 90 ％丙酮溶液
          調整離心管內液體體積至 10mL 。
        3.將離心管置於 4  ℃及黑暗下靜置 2  小時以上。
        4.將離心管放入離心機以 500×g 離心 20 分鐘。
        5.離心後之上清液移入乾淨之離心管中並記錄體積（L）。
  （二）分光光度計定量
        1.將七、步驟（一）5 萃取液放入 1㎝  光徑之樣品槽中，分別
          讀取其在波長 750、664 、647 及 630nm  之吸光度值並記錄
          之；各吸光度值分別代表濁度、葉綠素 a、b 及 c  等之相對
          濃度。
        2.每一批樣品須以一片不含葉綠素ａ之濾膜依七、步驟（一）同
          時做空白分析；樣品之吸光度值須扣除空白分析值。

八、結果處理
  （一）萃取液中葉綠素 a  之濃度（Ca）（mg/L）
        ＝11.85（OD664－Od750）－1.54（OD647 －OD750）－0.08（OD
        630－OD750）
  （二）水樣中葉綠素 a  之濃度（mg/m^3）

            Ca×萃取液體積（L）
        ＝──────────
              水樣體積（m^3）

九、品質管制
  （一）萃取液在波長 664nm  之吸光度必須介於 0.1  至 1.0  之間，
        否則須調整水樣過濾體積。
  （二）若水樣 pH 呈酸性則必須立刻處理，以避免葉綠素 a  在酸性條
        件下分解。
  （三）操作萃取過程中必須在弱光下進行。並使用不透明容器以避免葉
        綠素 a分解。
  （四）必要時可由配製標準葉綠素ａ，校正計算結果。

十、精密度及準確度
    略

十一、參考資料
    （一）APHA, AWWA, and WPCF, 1992. Standard methods for the
          examination of water and wastewater, 18th ed., America
          n Public Health Association, Washington D.C.
    （二）ASTM, 1987. Standard practices for measurement of chlo
          rophyll content of algae in surface waters, Designati
          on: D3731-87, PP.15-18.
    （三）Parsons, T.R.,Maita, Y., and Lalli, C.M. 1984. Determi
          nation of chlorophylls and total carotenoids, Spectro
          photometric method. In "A manual of chemical and biol
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          N.Y. U.S.A PP.101-104.