1.適用範圍：本檢驗方法適用於畜禽水產等食品中殘留鏈黴素（strepto-
  mycin） 與雙氫鏈黴素（dihydrostreptomycin） 之檢驗。

2.檢驗方法：高效液相層析法（high performance liquid chromatogra-
  phy, HPLC）。
  2.1 裝置：
    2.1.1 高效液相層析儀：
      2.1.1.1 檢出器：具有激發波長 263nm及發射波長 435nm之螢光檢
              出器（fluorescence detector）。
      2.1.1.2 層析管：Supelcosil LC-ABZ ，5μm，內徑 4.6mm×25cm
              或同級品。
      2.1.1.3 後置反應裝置（Post-column reactor）：
        2.1.1.3.1 恆溫槽：可加熱至65℃。
        2.1.1.3.2 氫氧化鈉溶液反應圈：內徑 0.5mm×3.6m之不鏽鋼管
                  。
    2.1.2 旋渦混合器（Vortex mixer）。
    2.1.3 振盪器（Shaker）。
    2.1.4 離心機（Centrifuge）。
    2.1.5 真空固相萃取裝置（Solid phase extraction vacuum manif-
          old ）。
    2.1.6 氮氣蒸發裝置（Nitrogen evaporator）。
    2.1.7 攪拌均質器（Blender）。
  2.2 試藥：
      甲醇、乙  、己烷磺酸鈉鹽（1-hexanesulfonic acid, sodium s-
      alt ）採液相層析級；三氯乙酸（trichloroacetic acid）、磷酸
      二氫鉀、磷酸氫二鉀、1,2-金雞鈉 -4-磺酸（1,2-naphthoquin-
      one-4-sulfonic acid sodium salt, NQS）、二水合草酸（oxalic
      acid dihydrate）、氫氧化鈉、硫酸鈉、磷酸及醋酸均採試藥特級
      ；硫酸鏈黴素及硫酸雙氫鏈黴素對照標準品。
  2.3 器具及材料：
    2.3.1 離心管：50mL，附蓋。
    2.3.2 容量瓶： 1、25、50、 100、 200、 500及1000mL。
    2.3.3 C18 固相萃取匣：500 mg，Sep-Pak Vac C18 或同級品。
    2.3.4 濾膜：孔徑0.45μm，nylon材質。
    2.3.5 抽氣瓶：1000mL。
  2.4 試劑之調製：
    2.4.1 7.5 ％二水合草酸溶液：
              稱取二水合草酸 15g，以水溶解後使成 200mL。
    2.4.2 10％三氯乙酸溶液：
          稱取三氯乙酸 20g，以水溶解後使成 200mL。
    2.4.3 0.2 M 離子配對試劑：
          稱取己烷磺酸鈉鹽 1.88g，以水溶解後使成50mL。
    2.4.4 2 M 氫氧化鈉溶液：
          稱取氫氧化鈉8g，以水溶解後使成 100mL。
    2.4.5 0.02 M己烷磺酸鈉鹽緩衝溶液：
          稱取己烷磺酸鈉鹽 1.88g，以水溶解，加入醋酸 1mL，加水使
          成 500mL。
    2.4.6 0.2 M 磷酸氫二鉀溶液：
          稱取磷酸氫二鉀 6.97g，以水溶解後使成 200mL。
    2.4.7 0.2 M 磷酸溶液：
          量取磷酸1.37mL，以水溶解後使成 100mL。
    2.4.8 0.2 M pH 3.3磷酸緩衝溶液：
          稱取磷酸二氫鉀13.61g，以去離子水溶解後定容至 500mL，再
          以0.2M磷酸溶液調整pH值至 3.3。
  2.5 移動相溶液之調製：
    2.5.1 稱取硫酸鈉1.5g、己烷磺酸鈉鹽1.8g、1,2-金雞鈉 -4-磺酸
          0.8g，以去離子水 500mL溶解後，加入0.2M pH 3.3 磷酸緩衝
          溶液50mL及乙  55mL，再以去離子水定容至1000mL，混勻，以
          濾膜過濾，取濾液供作肉類檢體分析之移動相溶液。
    2.5.2 稱取硫酸鈉1.5g、己烷磺酸鈉鹽1.8g、1,2-金雞鈉 -4-磺酸
          0.8g，以去離子水 500mL溶解後，加入0.2M pH 3.3 磷酸緩衝
          溶液50mL及乙  80mL，再以去離子水定容至1000mL，混勻，以
          濾膜過濾，取濾液供作乳品檢體分析之移動相溶液。
  2.6 後置反應溶液：
      稱取氫氧化鈉9.2g，以水溶解後使成1000mL，配製成 0.23M氫氧化
      鈉溶液，以濾膜過濾，取濾液供作後置反應溶液。
  2.7 標準溶液之配製：
      稱取硫酸鏈黴素及硫酸雙氫鏈黴素對照標準品各約12.5mg，精確稱
      定，分別以去離子水溶解並定容至25mL作為標準原液。使用時再以
      去離子水稀釋成濃度為 0.1～10μg/mL，供作標準溶液。
  2.8 檢液之調製：
    2.8.1 萃取：
      2.8.1.1 乳品
              量取檢體10mL，置於50mL離心管中，加入 7.5％二水合草
              酸溶液 2mL，振盪20分鐘，以 3500rpm離心20分鐘。取上
              澄液，加入10％三氯乙酸溶液 2mL，振盪20分鐘，以3500
              rpm 離心20分鐘。取上澄液，加0.2M離子配對試劑 0.8mL
              ，室溫下靜置15分鐘，加入2M氫氧化鈉溶液 0.7mL，混勻
              後以 3500rpm離心20分鐘，上澄液供淨化用。
      2.8.1.2 肉類
              檢體細切、均質後，取檢體5g，精確稱定，置於50mL離心
              管中，加入0.2M磷酸氫二鉀溶液15mL，混勻後加入 7.5％
              二水合草酸溶液 4mL，振盪20分鐘，以 3500rpm離心20分
              鐘。取上澄液，加入10％三氯乙酸溶液 4mL，振盪20分鐘
              ，以 3500rpm離心20分鐘。
              取上澄液，加入0.2M離子配對試劑 1.6mL，室溫下靜置15
              分鐘，加入2M氫氧化鈉溶液 1.4mL，混勻後以 3500rpm離
              心20分鐘，上澄液供淨化用。
    2.8.2 淨化：
          取 2.8.1節淨化用溶液，注入預經甲醇 3mL，去離子水 3mL及
          0.02 M己烷磺酸鈉鹽緩衝溶液 3mL依序潤洗之 C18固相萃取匣
          。棄流出液，以去離子水 3mL流洗兩次，棄洗液，再以 0.02M
          己烷磺酸鈉鹽緩衝溶液與乙  9：11（v/v）之混合溶液 2mL沖
          提，沖提液於40℃水浴以氮氣吹乾，加入去離子水定容至 1mL
          ，以濾膜過濾，供作檢液。
  2.9 鑑別試驗及含量測定：
      精確量取檢液及標準溶液各100μL，分別注入高效液相層析儀中，
      參照下列條件進行液相層析，就檢液與標準溶液所得波峰之滯留時
      間比較鑑別之，並依下列計算式求出檢體中鏈黴素與雙氫鏈黴素之
      含量（ ppm）：
                                           C×V
      檢體中鏈黴素與雙氫鏈黴素含量（ppm）＝──
                                            M
      C ：由標準溶液求得檢液中鏈黴素與雙氫鏈黴素之濃度（μg/mL）
      V ：檢體經淨化後最後定容之體積（mL）
      M ：取樣分析檢體之重量（g）
      高效液相層析測定條件：
      層析管柱：Supelcosil LC-ABZ，5 μm，內徑4.6mm×25cm
      螢光檢測器：激發波長 263nm，發射波長 435nm
      移動相溶液：依 2.5節所調製之溶液
      移動相流速：0.8 mL/min
      後置反應溶液：依 2.6節所調製之溶液
      後置反應溶液流速：0.5 mL/min
      後置反應槽溫度：65℃
      備註：
      1.本檢驗方法之檢出限量於乳品為 0.02ppm，肉類為 0.1ppm。
      2.食品中若有影響檢驗結果之物質，應自行探討。