一、方法概要
    本方法係利用內含嗜熱桿菌芽孢（Geobacillus stearothermophilus
     spores ATCC 7953 ）之生物指示劑（biological indicator, BI）
    ，將其置於16層包布之挑戰包（challenge pack, CP）中，以模擬滅
    菌過程之蒸氣阻絕，並將挑戰包置於滅菌設施之冷點（ cold spot）
    ，經高溫高壓蒸氣滅菌後，經培養後觀察變化，或以判讀機進行快速
    螢光判讀（ 2-3hr），若呈陰性，表示達滅菌效能。

二、適用範圍
    本方法適用於生物醫療廢事業廢棄物滅菌處理專用高溫高壓蒸氣滅菌
    法設施功能之規範。

三、干擾
    高溫高壓蒸氣滅菌設施功能檢測使用之生物指示劑，應以不同的滅菌
    設備操作模式，選用正確型號的生物指示劑，且不得以任何殺菌程序
    先行處理（如：化學殺菌劑、微波或放射線處理），避免滅菌後之生
    物指示劑於培養後，呈偽陰性反應。

四、設備及材料
  （一）高溫高壓蒸氣滅菌設施：需符合事業廢棄物貯存清除處?方法及
        設施標準第21條第 2項規定。
  （二）培養箱裝備：溫度能保持 60 ± 3℃者，或依生物指示劑製造廠
        商所建議之培養條件條件進行培養與判讀。
  （三）判讀機：可進行培養及快速螢光判讀，或依判讀機製造廠商所建
        議之培養條件進行培養與判讀。
  （四）挑戰包：以16條清洗乾淨，可重複使用的棉布或吸水性良好之布
        巾（烘乾後靜置2小時）製作，布巾大小約16吋×26吋（約41公分
         × 66公分）。
  （五）布巾製作方式如下（如圖一）：
        1.將16條布巾縱向摺成 3折，然後橫向對摺。
        2.將布巾上下依序堆疊起來，每條布巾的對摺處與下一條相反。
        3.再用耐熱繩子將它整綑固定好。其大小接近23cm x23 cm x 15
          cm（長 x寬 x高）。
  （六）滅菌指示帶：依化學指示劑分級制度（如附件一）作標示。

五、試劑
    生物指示劑：每瓶孢子測試瓶內含孢子數介於 105至 107之間的嗜熱
    桿菌芽孢，營養基、碳水化合物、及酸鹼指示劑。

六、採樣與保存
    略

七、步驟
  （一）將生物指示劑安瓶，放在挑戰包第八和第九條布巾之間的中心點
        ，再用耐熱繩子將它整綑固定好。
  （二）將挑戰包與待滅菌物一起放入高溫高壓滅菌設施內，挑戰包放置
        於高溫高壓滅菌設施內冷點位置（一般為排水口或排氣口）（如
        圖二）。
  （三）高溫高壓滅菌設施滅菌操作，依平時滅菌方式操作，設施內除挑
        戰包外，其餘之待滅菌物，其物理組成應與平日滅菌操作之待滅
        菌物相當，且包裝容量（或重量）、密度、水分含量不得低於平
        日滅菌操作之待滅菌物。
        1.重力鍋滅菌操作條件為；滅菌操作溫度 121℃（ 250℉）以上
          ，每平方公分1.06公斤（每平方英吋15磅）以上之壓力，加熱
          時間為60分鐘以上之重力鍋。
        2.真空鍋操作條件為； 135℃（ 275℉）以上，每平方公分2.18
          公斤（每平方英吋31磅）以上之壓力，加熱時間為45分鐘以上
          。
  （四）對於待滅菌物採個別包裝者，於每一包裝袋均須使用滅菌指示帶
        ，以區分是否完成滅菌處理程序。
  （五）滅菌完成後，需等溫度及壓力降至安全範圍後，將生物指示劑取
        出，置入溫度為 60 ± 3℃  的培養箱裝置中進行培養。或依生
        物指示劑製造廠商所建議之培養方式進行培養與判讀。
  （六）另準備對照組測試，同時準備同一廠牌及批號之未滅菌的生物指
        示劑安瓶進行培養，作為對照組，以檢測生物指示劑的有效性及
        培養裝置功能正常與否。

八、結果處理
  （一）生物指示劑安瓶經滅菌培養後無生長現象，顏色維持原來的紅紫
        （橘黃）色，且對照組呈細菌生長之混濁現象（此為 7天混濁判
        讀），顏色並由紅紫（橘黃）色變成黃色（此為24hr顏色判讀）
        ，或以判讀機進行快速螢光判讀（ 2-3hr），若呈陰性，則判定
        為達到滅菌效能。
  （二）經滅菌後之生物指示劑安瓶，和對照組內均呈細菌生長之混濁現
        象（此為 7天混濁判讀），顏色並由紅紫色（橘黃）變成黃色（
        此為24hr顏色判讀），或以判讀機進行快速螢光判讀（ 2-3hr）
        ，若呈陽性，則判定為滅菌不完全。
  （三）生物廢棄物高溫高壓滅菌設施操作檢測紀錄，須註明操作日期，
        滅菌模式、溫度、壓力、進鍋時間、滅菌時間、出鍋時間、生物
        指示劑廠牌及批號及操作人員簽章等。

九、品質管制
  （一）操作人員應具備微生物基本訓練及相關滅菌知識。
  （二）廢棄物高溫高壓滅菌設施操作規範、紀錄及頻率，可參考「事業
        廢棄物貯存清除處理方法及設施標準」、「有害事業廢棄物檢測
        及紀錄管理辦法」、「感染性廢棄物滅菌處理標準及相關規定」
        、「醫療事業廢棄物高溫高壓滅菌處理手冊」等規定辦理。
  （三）生物醫療廢棄物之高溫高壓滅菌設施操作人員，須依「鍋爐及壓
        力容器安全規則」規定辦理。

十、精密度與準確度
    略

十一、參考文獻
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          h care facilities ANSI/AAMI ST79:2006/A2:2009.
    （二）江舟峰、梁永政：改善中國醫藥大學附設醫院高溫高壓滅菌效
          能之評估與建議。台中：中國醫藥大學附設醫院輔導技術報告
          ，2007。
    （三）Guideline for Disinfection and Sterilization in Health
          care Facilities.  （2008） U.S.A. CDC.2.
    （四）滅菌監測之感染控制措施指引，2010. 衛生署疾病管制局
    （五）Martha L. Young . Product recall. Managing Infection C
          ontrol 2005 Dec, p100.