1.適用範圍：本檢驗方法適用於禽畜肉及內臟中磺胺唑（sulfathiazo-
  le），磺胺二甲嘧啶（sulfamethazine），磺胺一甲氧嘧啶（sulfamo-
  nomethoxine ），磺胺二甲氧嘧啶（sulfadimethoxine），磺胺奎林（
  sulfaquinoxaline）等磺胺劑之檢驗。

2.檢驗方法：
2.1.薄層層析法（Thin Layer Chromatography） ：適用於上述磺胺劑之
    定性。
2.1.1.裝置：
2.1.1.1.果汁機
2.1.1.2.攪拌均質機
2.1.1.3.離心機：轉速能達 3000 rpm 者。
2.1.1.4.振盪器
2.1.1.5.減壓濃縮裝置
2.1.1.6.紫外燈：具 365 nm 波長者。
2.1.2.試藥：
      乙、正己烷、丙酮、氯仿，均採液相層析級；無水硫酸鈉、正丁
      醇，採試藥特級；螢光標示劑（Fluorescamine） 。
2.1.3.器具及材料：
2.1.3.1.分液漏斗
2.1.3.2.矽膠薄層板：Silica Gel 60.
2.1.3.3.展開槽
2.1.3.4.螢光標示槽：長度 21 cm，高度 21 cm，寬度 0.8  cm，不銹鋼
        製。
2.1.4.展開溶媒：
      氯仿：正丁醇（80：20）
2.1.5.螢光標示液之調製：
      取螢光標示劑 25mg 溶於丙酮 250mL。
2.1.6.標準溶液之調製：
      精確稱取磺胺唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺一甲氧嘧啶、磺胺二甲氧
      嘧啶、磺胺奎林標準品各 100mg，分別溶於丙酮使成 100mL。再以
      2.2.5.節之移動相溶液稀釋至 0.5–3.0 ppm ，供作標準溶液。
2.1.7.飽和乙正己烷溶液之調製：
      量取正己烷 500 mL 於分液漏斗中，加乙 20mL 充分振搖，靜置
      分層，分取正己烷層（上層）備用。
2.1.8.檢液之調製：
      檢體細切，以果汁機攪拌均勻後稱取 10g，置於攪拌均質器中，加
      入乙 100mL  與無水硫酸鈉 50g，充分攪拌 5  分鐘，移入離心
      瓶中，以 3000 rpm 離心 10 分鐘，經濾紙過濾，取澄清液，殘渣
      以乙 50mL 依上述步驟再萃取一次，合併澄清液，加入飽和乙
      正己烷溶液 30mL ，激烈振搖 5  分鐘，靜置分層，去正己烷層，
      乙層續以飽和乙正己烷溶液 30mL 依上述步驟再操作二次，乙
      層移入濃縮瓶，於 40 ℃水浴中減壓濃縮至剩約 1mL，供作檢液
      。
2.1.9.鑑別試驗：
      沿矽膠薄層板下端 2 cm 之橫向每隔 1 cm 分別點上直徑約 0.3cm
      之檢液及標準溶液（各約 20 mL），風乾後展開，展開溶媒浸沒薄
      層板下端 0.5–1 cm，展開高度約 12 cm  後取出風乾，浸入盛有
      螢光標示液之螢光標示槽中，迅速取出風乾，15–30  分鐘內於紫
      外燈下照射觀察檢液上昇之斑點位置及顏色，與標準溶液之黃綠色
      螢光斑點比較鑑別之。
2.2.高效液相層析法（High Performance Liquid Chromatography）：適
    用於第 1  節中磺胺劑之定量。
2.2.1.裝置：
      高效液相層析儀，具紫外光檢出器者。
2.2.2.試藥：
      甲醇、丙酮、乙、正己烷，均採液相層析級；醋酸、無水硫酸鈉
      ，採試藥特級；氧化鋁（Active I, basic, mesh 50-200）。
2.2.3.器具及材料：
2.2.3.1.淨化管：內徑 1.5 cm ，高度 30cm 之玻璃管柱。
2.2.3.2.濾膜：孔徑 0.45 μm ，Polyvinylidene difluoride 材質。
2.2.4.氧化鋁淨化管：
      取氧化鋁 6g 置入淨化管中，先以甲醇 50mL 清洗後，再以 85 ％
      甲醇 30mL 清洗之。
2.2.5.移動相（Mobile Phase）溶液之配製：
      以醋酸調去離子水之 pH 值使成 3.6，與 乙以 80：20（v/v）
      之比例混勻，以濾膜過濾，取濾液作移動相溶液。
2.2.6.檢液之調製：
      依 2.1.8  節所調製之檢液，以 85 ％甲醇定容至 4mL，注入氧化
      鋁淨化管內，取 85 ％甲醇 10mL 清洗淨化管，洗液棄之，以甲醇
      ：醋酸：去離子水（30：0.4：70, v/v）溶液 30mL 溶離磺胺劑，
      收集溶離液，於 65 ℃水浴中減壓濃縮至乾，精確量取液相層析移
      動相溶液 1mL  溶解，經濾膜過濾後，供作定量用檢液。
2.2.7.定量：
2.2.7.1.高效液相層析儀條件：
        分離管：C18 ，顆粒大小 10 μm ，內徑 3.9mm，長 30 cm。
        移動相溶液：依 2.2.5  節所調製之溶液。
        流速：1.4 mL/min。
        檢出器：紫外光檢出器（波長 267nm）。
        記錄器速度：0.3 cm/min。
2.2.7.2.鑑別試驗及含量測定：
        檢液及標準溶液各取 20 μL ，分別注入液相層析儀，就檢液所
        得波峰之滯留時間，分別與標準溶液比較鑑別之。並由適量檢液
        所得之峰高或面積（peak height or area） ，依另取之標準溶
        液按上述方法作成檢量線，求出檢體中磺胺劑之含量。

註：1.薄層層析法之最低檢出量為 5 ppb，高效液相層析法之最低檢出量
      為 10 ppb 。
    2.高效液相層析儀之最低偵測極限，以標準溶液計為 0.1 ppm。
    3.檢體採集後應貯存於攝氏零下 18 度之冷凍庫中，直至分析工作開
      始，並以一個星期為保存期限。
    4.檢測樣品時需校正回收率。